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大肠杆菌浸染毒性噬菌体的鉴定

日期:2021-02-22 作者:发酵罐专业生产厂家上海联环公司 阅读:314

1.配制培养基:
LB液体培养基(1000ml水,10g蛋白胨:5g酵母粉:5g氯化钠)、1.5%的固体培养基、0.7%的半固体培养基;
2. 倒平板:将1.5%的固体培养基溶化,每个平板倒10-15ml的1.5%固体培养基,然后静置至平板上没有水珠为宜;
3. 分装0.7%的半固体培养基:将0.7%的半固体培养基加热溶化,然后用5ml的移液枪向每个试管加入5ml的半固体培养基;试管的数量和上一步平板数是相同的;
4. 等到试管中培养基温度降至40℃左右时(不烫手),迅速向试管中加入100ul敏感菌和100ul的待测噬菌体液,摇匀;
5. 将摇匀好的该培养基迅速倒入之前已倒有1.5%固体培养基平板中,晃动平板,使其铺满平板,静置;
6. 待所有平板倒好后,将其放入30℃恒温箱中培养12h左右,即可观察有无噬菌斑。
8.2减少或避免噬菌体浸染的防范措施
1. 从菌种构建开始,克隆菌种的感受态细胞及其它试剂要保证纯净没有被污染;
2. 发酵系统中的空气系统要定期消毒并检查;
3. 发酵种子活化的环境要保持洁净,并定期消毒;
4. 发酵罐接种时要无菌操作,发酵过程取样后的废液要进行收集灭菌处理;
5. 发酵过程的尾气要通入吸收液处理后再排掉;
6. 定期检修发酵罐避免消毒死角的存在,发酵系统中的补料设施也要进行检查;
7. 发酵场所的地沟,排水池等要保持清洁,保证无活菌排放,并定期消毒;

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